Original
Análisis de la metilación de la región promotora del gen BMPR2 en pacientes con hipertensión arterial pulmonarMethylation Analysis of the BMPR2 Gene Promoter Region in Patients With Pulmonary Arterial Hypertension

https://doi.org/10.1016/j.arbres.2015.10.006Get rights and content

Resumen

Introducción

La hipertensión arterial pulmonar es una enfermedad infrecuente caracterizada por una obstrucción progresiva de las arterias pulmonares. El receptor tipo II de la proteína ósea morfogenética (BMPR2) es el principal gen relacionado con esta enfermedad. EL objetivo de este trabajo fue analizar el patrón de metilación de la región promotora del gen BMPR2 en individuos con hipertensión arterial pulmonar y controles.

Métodos

Se analizó la región a estudio con los softwares Methyl Primer Express® v.1.0 y MatInspector. El ADN genómico, obtenido a partir de sangre periférica, fue modificado con bisulfito de sodio. La metilación se analizó utilizando PCR específica de metilación. Como control positivo de metilación se utilizó ADN tratado con CpG metiltransferasa y como control positivo de expresión se utilizó ADN del cultivo celular H1299.

Resultados

Se ha identificado una isla CpG susceptible de presentar metilación en la región promotora del gen que contiene secuencias específicas como sitios de unión a factores de trascripción NIT-2 (global-acting regulatory protein), sex-determining region Y y heat shock factor. No se han encontrado indicios de metilación en los pacientes ni en los controles. En las células H1299, que expresan el gen BMPR2, no se ha identificado metilación en la isla CpG analizada.

Conclusiones

No se detectaron indicios de metilación en la región promotora a estudio en pacientes y controles, siendo esta la región más adecuada para realizar el estudio debido al alto número de sitios de unión a factores de transcripción que podrían estar involucrados en la correcta funcionalidad del gen.

Abstract

Introduction

Pulmonary arterial hypertension is characterizated by obstruction of the pulmonary arteries. The gene mainly related to pathology is the bone morphogenetic protein receptor type II (BMPR2). The aim of this study was to analyze the methylation pattern of the BMPR2 promoter region in patients and controls.

Methods

We used Methyl Primer Express® v.1.0 and MatInspector softwares to analyze this region. Genomic DNA obtained from the peripheral blood of patients and controls was modified with sodium bisulphite. Methylation was analyzed using methylation-specific PCR. DNA treated with CpG methyltransferase was used as a positive control for methylation and H1299 cell culture DNA was used as positive control for gene expression.

Results

We identified a CpG island, which may have been methylated, in the BMPR2 promoter region, in addition to NIT-2 (global-acting regulatory protein), sex-determining region Y) and heat shock factor transcription factor binding sites. We found no evidence of methylation in patients and controls. No methylated CpG sites were identified in H1299 cells expressing the BMPR2 gene.

Conclusions

The BMPR2 promoter region is the most suitable for study because of the high number of transcription factor binding sites that could alter gene function. No evidence of methylation was detected in this region in patients and controls.

Section snippets

Introducción

La hipertensión arterial pulmonar (HAP; OMIM #178600; ORPHA 422) es una enfermedad progresiva que se caracteriza por la obstrucción de las arterias pulmonares1. Se define por un aumento sostenido de la presión arterial pulmonar media (PAPm) ≥ 25 mmHg en reposo2. Los síntomas incluyen disnea, síncope, dolor torácico y, finalmente, la muerte prematura por insuficiencia cardiaca derecha1. Los cambios estructurales y funcionales en la pared vascular y la formación de trombos son los principales

Procedencia y evaluación clínica de los pacientes

Los pacientes objeto de estudio se reclutaron en hospitales de Galicia, Hospital Valdecilla de Santander y de la Asociación Española de Hipertensión Pulmonar. En todos los casos se obtuvo el consentimiento informado, actuándose de acuerdo con los principios éticos para la investigación médica en seres humanos establecidos en la declaración de Helsinki (http://www.wma.net) y promulgados por la Asociación Médica Mundial. El Comité Ético local (Comité Autonómico de Ética da Investigación de

Pacientes

Se incluyeron 55 pacientes, 28 diagnosticados de HAPI y 27 de HAPA. En el momento del diagnóstico 7 pacientes se encontraban en clase funcional I, 19 pacientes en CF II, 25 en CF III y 4 en CF IV (fig. 1). En total, 34 pacientes fueron considerados buenos respondedores. Se consideró buena respuesta al tratamiento tras 6 meses de mejoría de al menos una CF, disminución del propéptido natriurético cerebral (proBNP) e incremento de la distancia recorrida en el TM6 M un mínimo del 15%. Las

Discusión

La epigenética es la rama de la genética que se encarga de estudiar y describir los cambios en el fenotipo o en la expresión de genes que no están involucrados en la secuencia del ADN en sí18, 19, 20, 21, 22. En nuestra serie de pacientes, en la región promotora analizada, no se han encontrado resultados positivos para la metilación de los sitios CpG, a pesar de ser una región que contiene un gran número de uniones a factores de transcripción y una larga isla CpG susceptible de metilación. Los

Financiación

Este estudio ha sido financiado con los proyectos IN-202-05 de SOGAPAR, CO-0118-2012 de Actelion Pharmaceuticals e INBIOMED 2009-063 Xunta de Galicia.

Autoría/colaboradores

GP ha realizado el diseño del estudio, el análisis genético, el análisis de datos, las correlaciones y la redacción del manuscrito. AB se ha encargado de la recolección de muestras y datos clínicos, del análisis de datos y de la redacción del manuscrito. DV ha realizado el diseño y coordinación del estudio, el análisis de datos y la redacción del manuscrito. Todos los autores han leído y aprobado el manuscrito final.

Conflicto de intereses

Adolfo Baloira ha recibido becas de investigación de Actelion y ha actuado como consultor de Actelion, GSK, Pfizer, Lilly, Bayer y Ferrer.

El resto de los autores declaran no tener conflicto de intereses.

Agradecimientos

Queremos expresar nuestro agradecimiento a los pacientes que han dado su consentimiento para participar en este estudio. También dar las gracias a los médicos que han facilitado la inclusión de pacientes (Carlos Vilariño Pombo, José Manuel Cifrián y Olalla Añón) y, finalmente, nos gustaría agradecer la colaboración de la Asociación Española de Hipertensión Pulmonar, Programa de Apoyo a las Capacidades Biomédicas (BIOCAPS) FP7-REGPOT316265.

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