Labeling of antibodies with radioactive isotopes in plant virus serology

Abstract

Antibodies isolated from antiserum against plant viruses were labeled with the isotope³⁵S as follows: the mixture of antibodies with radioactive cysteine hydrochloride was allowed to stand for half an hour, run on a Sephadex G-25 column and individual fractions were collected. Sephadex G-50 bed was equilibrated and washed with saline (0,85 % NaCl) phosphate buffer (0,01 m) pH 7,2. Fractions showing the highest radioactivity and at the same time the most evident serological reaction were combined and used as³⁵S labeled antibodies. The labeled antibodies were used for rubbing leaves; the leaves were afterwards incubated, washed, killed, dried and then subjected to autoradiography. The method of indirect serological reaction also proved to be very good. Using this method, pig gamma globulin against rabbit gamma globulin was labeled with³⁵ S; this labeled gamma globulin was then used to detect serological reaction on leaves between the virus and homologous rabbit antiserum and/or antibodies. The results of those reactions were also determined by autoradiography.

Exact procedure for labeling antibodies, carrying out serological reactions and autoradiography is desribed.

Abstract

Isolované protilátky z antisér proti rostlinným virům byly značeny isotopem³⁵S tak, že směs protilátek s radioaktivním hydrochloridem cysteinu byla po 1/2 hod. stání propuštěna přes sloupeo Sephadex G-50 a odebrány jednotlivé frakoe. Sloupec Sephadexu G-50 ekvilibrujeme a promýváme fys. roztokem pufrovaným fosfátovym pufrem na pH 7,2. frakce, které vykazovaly nejvyšší radioaktiyitu a zároveň největsi sérologickou reakoi, byly spojeny a pouzity jako protilátky oznacené 65S. Znacenymi protilátkami byly potřeny povrchy listů a po inkubaci, opláchnutí, usmroení a vysusení byly listy podrobeny autoradiografii. Velmi dobře se osvědčila též metoda nepřimé sérologické reakce. při které byly³⁵S označeny prasečí gamaglobulèny proti králičím gamaglobulčnům a těmi detegována sérologická reakee na listech mezi virem a homologním králi7#x010D;ím antisérem, resp. protilátkami. Také vysledky těohto reakcí se zjišťují autoradiograficky. Je popsán presný postup zna7#x010Dení protilátek, prováděnf sérologickýeh reakoí a autoradiografie.